DIGラベリング法は、植物のジギタリス （Digitalis purpureaとDigitalis lanata）由来のステロイドに基づいています。ジギタリスの花と葉がジゴキシゲニンの唯一の天然源であり、抗DIG抗体は他の生体物質と交叉しません。ジゴキシゲニンは11個の炭素原子を含むスペーサーアームをでウリジンヌクレオチドのC-5位置に結合しています（以下の図を参照）。

DNA Polymerase（E.coli 由来DNA Polymerase I、T4 DNA Polymerase、T7 DNA Polymerase、逆転写酵素、ならびにTaq DNA Polymerase等） やRNA Polymerase（SP6、T3、あるいはT7 RNA Polymerase）、Transferaseにより、DIG標識ヌクレオチドを核酸プローブに取り込むことができます。ランダムプライムラベリング、 ニックトランスレーション、PCR、3'-エンドラベリング／テイリング、あるいはin vitro 転写によりDIG標識を加えることができます。さらに、DIG-NHSエステルを用いて化学的にラベリングすることもできます。

ハイブリダイズしたDIG標識プローブは、アルカリホスファターゼやペルオキシダーゼ、フルオレセイン、ローダミンと結合した抗ジゴキシゲニン （抗DIG）抗体を用いて検出できます。あるいは、非標識モノクローナル抗ジゴキシゲニン抗体と二次抗体を使用して検出することもできます。

検出感度は、抗DIG抗体の検出法に依存します。例えば、アルカリホスファターゼ標識抗DIG抗体を発色基質（NBT/BCIP）または 蛍光基質（HNPP）を用いて検出する場合、一般的な（サザンブロット上の） 検出感度は0.1 pgです。

放射性（RI）標識およびその検出技術と比べ、DIGシステムには複数の利点があります。

 

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DIGシステムは、DNAおよびRNAあるいはオリゴヌクレオチドプローブの安全で 効率的なラベリングが可能です。これらのプローブは、以下のすべてのハイブリダイゼーション反応に使用できます。

• サザンブロット法
• ドットブロット法
• ノーザンブロット法
• アレイ
• コロニーハイブリダイゼーション法
• In situハイブリダイゼーション
• ELISA

 

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