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DIG:Non-RI Labeling & Detection

ロシュ・アプライド・サイエンス

DIG

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FAQ

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サザン・ノーザンなどのフィルターハイブリダイゼーションのFAQs
in situハイブリダイゼーションのFAQs

Non-RIの核酸標識・検出システム
サザン・ノーザンはもちろん、高感度なin situハイブリダイゼーションに最適なシステムです

<DIGシステムとは・・・>

DIGシステムとはジゴキシゲニン(Digoxigein:DIG)と言うハプテンをプローブとする核酸に標識し、抗体を用いてDIGハプテンを認識し、その抗体に標識した酵素あるいは他の反応系で目的の核酸配列を検出するシステムです。ジゴキシゲニンは心臓病の治療薬として知られる強心配糖体ジゴキシン研究の経験から、人工的ハプテンとして利用できることを見出しました。ジゴキシゲニン(DIG)と3分子のジキトキソースからなるジゴキシンはジギタリス植物(Digitalis purpureaおよびDigitalis lanata)の花と葉より得られる物質であり、その存在はこの植物に限られています。その為、検出用特異抗体である抗DIG抗体は、他の生物由来の物質とは結合することはありません。また、ジゴキシゲニンは強い熱安定性(融点は222℃)を持ちます。これらの性質から、ジゴキシゲニンは核酸のハイブリダイゼーション反応に利用できることになりました。プローブの標識に用いるジゴキシゲニンは 11炭素鎖のスペーサーアームを介してウリジンヌクレオチドのC-5位に結合しています。このジゴキシゲニン標識dUTPやジゴキシゲニン標識UTPをプローブに付加させることにより、プローブの標識を行います。様々なラベリング方法がありますので、ご用途に沿ったラベリング方法をご選択頂けます。

<ラベリング&ディテクションキット 製品紹介>

DIG High Prime DNA Labeling & Detection Starter Kit I
ハイプライム法によるDIG標識プローブの合成とNBT/BCIP発色による検出試薬のキットです。サザンやコロニーハイブリダイゼーション、in situハイブリダイゼーションに最適なキットです。
DIG High Prime DNA Labeling & Detection Starter Kit II
ハイプライム法によるDIG標識プローブの合成とCSPD発光による検出試薬のキットです。サザンやノーザン、コロニーハイブリダイゼーションに最適なキットです。
DIG DNA Labeling & Detection Kit
標準的なランダムプライムド法によるDIG標識プローブの合成とNBT/BCIP発色による検出試薬のキットです。サザンやコロニーハイブリダイゼーション、in situハイブリダイゼーションに最適なキットです。
DIG Northern Starter Kit
in vitroトランスクリプションによるRNAプローブの合成とCDP-Star発光による検出試薬のキットです。ノーザンハイブリダイゼーションを始めるために最適なキットです。

<ラベリングキット 製品紹介>

PCR DIG Probe Synthesis Kit
PCR反応中にDIG-dUTPを取り込むことにより、DIG標識プローブを合成します。均一な長さのプローブが合成できること、また、僅かな量のテンプレートから指数関数的な量のプローブが合成出来ることから、最も推奨するDNPプローブ合成法です。
DIG DNA Labeling Kit
ランダムプライム法によるラベリングキットです。
DIG-High Prime
ランダムプライム法を改良したハイプライムによるラベリング試薬です。ラベリング反応に必要な酵素やバッファー、ヌクレオチドがプレミックスになっていますので、精製したテンプレートを混ぜるだけでご使用頂けます。
DIG RNA Labeling Kit(SP6/T7)
in vitro RNAトランスクリプション によるRNAプローブ合成キットです。添付のSP6、T7 RNA Polymeraseでセンス、アンチセンス鎖のプローブを合成します。ISHでは、最も多く使われているラベリング方法の一つです。
DIG Oligonucleotide 3’-end Labeling Kit, 2nd Generation
オリゴヌクレオチドの3’末端に標識ヌクレオチドを1つだけ付加させます。
DIG Oligonucleotide Tailing Kit, 2nd Generation
オリゴヌクレオチドの3’末端に標識ヌクレオチドと任意の未標識ヌクレオチドで標識テールを付加させます。
Nick Translation Kit
ニックトランスレーション法により標識プローブを合成します。
(注意)この製品にはDIGは含まれていません。別途、標識ヌクレオチドを購入する必要があります。

 

<ディテクションキット 製品紹介>

DIG Luminescent Detection Kit
アルカリフォスファターゼ基質のCSPDにより発光反応を起します。AP標識抗DIGFabフラグメントからブロッキング試薬、発光基質まで、検出ステップで必要な試薬がセットになっています。
DIG Nucleic Acid Detection Kit
アルカリフォスファターゼ基質のNBT/BCIPにより発色反応を起します。AP標識抗DIGFabフラグメントからブロッキング試薬、発色基質まで、検出ステップで必要な試薬がセットになっています。
 
     
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