DIGアプリケーションマニュアル for Filter Hyb.

このマニュアルは、DIG（ジゴキシゲニン）などのハプテン標識を用いたサザンハイブリダイゼーション、ノーザンハイブリダイゼーション、コロニー/プラークハイブリダイゼーションを対象としたマニュアルです。プローブのラベリングから、シグナル検出までの詳細について記載しております。DIGを用いたメンブレンハイブリダイゼーションを行う際の、ご参考にして頂ければ幸いです。

また、DIGアプリケーションマニュアル for In situ ハイブリダイゼーションもご用意しておりますので、In situ ハイブリダイゼーションを行う際には、こちらもご利用下さい。

このマニュアルは、印刷物としても無償で配布しております。製本版マニュアルはこちらからご請求下さい。

<目次>

はじめに

DIGシステムと本マニュアルの紹介

第1章DIGの基礎

1.	はじめに
2.	DIGラベリング
2.1	DIGによるノンラジオアクティブなラベリング法の概要
2.2	PCRラベリング法、ランダムプライムドラベリング法、RNAラベリング法の比較
3.	プローブのラベリング効率を評価する
3.1	直接検出アッセイの概要
3.2	PCRラベルされたプローブのゲル電気泳動による解析
4.	ターゲット核酸をアガロースゲル電気泳動する
4.1	ゲルにロードするターゲット核酸の量
4.2	アガロースゲルの調製と電気泳動
5.	ターゲット核酸をメンブレンへブロットトランスファーする
5.1	ブロッティングメンブレンについて
6	ターゲット核酸とプローブとのハイブリダイゼーション
6.1	ハイブリダイゼーション中でのDIGラベルされたプローブ濃度
6.2	最適なハイブリダイゼーション温度の決定
6.3	ハイブリダイゼーション用バッファーの組成
6.4	ハイブリダイゼーションの所要時間
7.	ブロットをストリンジェント洗浄する
8.	プローブとターゲット拡散とのハイブリッドを検出する
9.	メンブレンからのプローブの剥離とリプロービング
10.	DIGラベリングおよび検出実験のための設備
11.	DIG製品セレクションガイド