FAQ サイト (よくあるご質問とお答え)

特にリアルタイムPCR法に用いる場合は、できるだけRNAの状態での保存は避け、より安定なcDNAに逆転写して保存することをお奨めします。

保存する際は、下記を参考の上、RNA溶液を幾つかのチューブに小分けして保存し、再凍結を避ける事を推奨します。
これによって、凍結融解の繰り返しによるRNAの損傷や、RNaseによる分解の影響を少なくすることができます。

短期間の保存の場合：
RNAseフリーのTEバッファー（10 mM Tris, 1mM EDTA ）やRNaseフリーの水（ 0.1 mM EDTAを含んだ ）に溶解して - 20℃で保存できるとされています。
Note：RNAの保存のためにRNaseフリーにするには、EDTA溶液の使用が良く知られています（但し、古いEDTA溶液を使用した場合、微生物が存在することでRNase汚染を引き起こします）。　また - 80℃では、分解する事なくRNAを保存できるとされています。

長期保存の場合：
RNAをエタノール沈澱した後、- 80℃で保存します。
RNAは- 80℃で（水やバッファーで再溶解し、- 80℃で保存も可能）NH₄OAc/エタノール沈澱溶液中が最も安定です。

精製されたRNAの保存方法
・再溶解したRNAに、2倍量の70％または100％エタノールを加え、ペレット状のままRNAを保存します。
・酢酸ナトリウム（Sodium Acetate ）を添加後、遠心によってRNAを回収します。

RNAの回収と溶解
遠心分離後のRNAは、37℃で簡単に乾燥させたり、バキュームオーブンで乾燥させる事ができます。
Note:RNAペレットを完全に乾燥させないように注意します。完全に乾燥させたRNAペレットは、再溶解が困難になります。
RNAを使用する実験の場合、すべてのサンプルを氷上におきます（RNAを室温に置いておくと、分解され易いためです）。
RNaseフリーのTEバッファー（ 10 mM Tris, 1mM EDTA ）またはRNaseフリーの水（0.1mM EDTAを含む）をRNAに加え、再溶解し、その後氷上で15分間置きます。やさしくタッピング、または慎重にボルテックスを行います。

精製後のアプリケーションのためのRNAの沈澱
精製されたRNAは、場合によってはその後のアプリケーション用に沈澱と濃縮が必要となります。
酢酸アンモニウム（ NH₄OAc）沈澱（ 0.1量の5 M NH4OAc、2-2.5 倍量の100％エタノール、- 20℃、25分以上）で、RNAを回収できます。
濃度が低いRNA溶液（ng/ml）からのRNAを回収する場合、グリコーゲンやyeast RNA等を加えます。
Note：Protector RNaseインヒビターはRNAの分離や精製、その他の様々なアプリケーションでRNAを分解から守るために使用します。