テクニカルノート：FastStart High Fidelity PCR Systemを用いたマルチプレックスPCR

Gene Expression コーナー

ロシュ・アプライド・サイエンスのFastStart High Fidelity PCR Systemは、マルチプレックスPCRのためのPCR酵素システムの第一候補です。最新のAmplificationテクニカルノートでは「Step- by-Step Protocol for Multiplex PCR with the FastStart High Fidelity PCR System and the PCR Optimization Kit」が紹介されています。このPCRシステムは、PCR Optimization Kitで条件検討する事で、同時に18個までのPCR断片を増幅できます。

マルチプレックスPCRの最新テクニカルノート

このテクニカルノートは、複雑なプライマーセット（18のアンプリコン）を用いたマルチプレックスPCRでも、簡単な3ステップで最適化できることを示しています。その3ステップは、

1. アンプリコンのモノプレックスPCR：各プライマーセットで予想されるPCR産物を確認するために、各プライマーセット（モノプレックス）でPCRをする事は重要です。
2. PCR Optimization Kitのバッファーを使って マルチプレックスPCRを最適化します。
3. 最適なバッファーと様々な添加剤を用いてマルチプレックスPCRを最適化します。

これら全てのステップは、DNAとcDNA共に適用できます。cDNA合成には、Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kitを使用します。
このテクニカルノートは、DNAやRNAからマルチプレックスPCRを行う為の詳細なプロトコール、そのトラブルシューティング、9つのマルチプレックスPCRの例（お客様のデータを含む）、このPCRシステムの特徴を紹介しています。

• 18-プレックスPCR
• 1.8 kbまでの断片の増幅
• わずか0.375 ngテンプレートからの増幅
• 室温でのPCRセットアップ
• PCR Optimization Kitでの簡単なMgCl₂濃度とpHの最適化

このテクニカルノートは、下記URLからご覧頂けます。

http://www.roche-biochem.jp/pdf/prima/molecular_biology/pcr_t.pdf

Order INFO

図1：テクニカルノートからの引用例 最適なPCR反応バッファー（FastStart High Fidelity Buffer）と様々な添加物を加えたマルチプレックスPCR

BIOCHEMICA2006 NUMBER1 (No102)