リコンビナントプロティナーゼK －その優れた安定性

Tips & Facts

この特別な、遺伝子工学的にプロテアーゼを製造するための技術は、並外れた高い純度と活性を保証します。

変性剤と…

リコンビナントプロティナーゼKは広い範囲の使用条件で効率的で、頑強さの厳しい水準に合致します。酵素は、変性及び天然タンパク質に対して大きな分解 活性を持ちます。また、尿素、SDS、グアニジン塩など変性剤を含むバッファー中でも安定で、これらの試薬の存在下でより高い活性を示します。
　SDSによる活性化を試験するために、25μgのリコンビナントプロティナーゼKを9.5 mgのウシ血清アルブミン（BSA）と、Trisバッファー（50μM、pH 7.4）中で、37℃で60分間インキュベートしました。タンパク質分解は、HPLCで定量化しました。SDSの存在は、酵素活性を7倍に上昇させる結果 となりました（図1）。

図1. SDSによる活性化。SDSの存在は、酵素活性を7倍に上昇させる結果となった。

様々なpH値で…

様々なpH値でのプロティナーゼK活性を試験するために、酵素（1 mg/ml）をTrisバッファー（1 mM Tris、1 mM 酢酸カルシウム、様々なpH値）中で、21時間までインキュベートしました。酵素は広いpH域（pH 4.0 - 10.0）で安定性を示しました。至適な機能性は6.5 - 9.5のpH値で達成され、より高いアルカリpH値で、安定性の減少が観察されました（図2）。

図2. 25℃でのリコンビナントプロティナーゼKのpH安定性。 至適な機能性は6.5 - 9.5のpH値で達成された。

高温下で…

酵素活性の上昇が、より高い温度でも観察されます。リコンビナントプロティナーゼKは幅広い温度プロフィールを持っており、20 - 60℃で数時間後も80%以上の酵素活性を保持しています。熱安定性を試験するために、酵素（1 mg/ml）をTrisバッファー（1 mM Tris、1 mM 酢酸カルシウム、pH 6.5）中で、様々な温度で10分間インキュベートしました。65℃以上の温度でのみ、プロティナーゼKは活性の減少を示しました（図3）。

図3. 熱安定性。 3ロットの酵素が試験された。酵素は20 - 60℃で安定であり、65℃で活性が減少した。

高温での加速安定試験は、酵素の頑健さを示しています。3ロットの製品が35℃でほぼ1年間試験されました。高温下でのみ、わずかな活性の損失が観察されました（図4）。

図4. 加速温度安定性。35℃での3ロットの安定性の実測値が示された。

リコンビナントプロティナーゼKの改良された安定性は、幅広いアッセイ条件で見られ、広い基質特異性は、様々なサンプル調製において、この酵素を有用なものとしています。この酵素により、様々なサンプル試料からの損傷の無い高分子核酸の分離が、真に可能となりました。

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製品名	製品番号	包装単位	希望価格
プロティナーゼK、 リコンビナント、PCRグレード （溶液）	3115887	1.25 ml	←製品番号をクリック
	3115828	5 ml	←製品番号をクリック
	3115844	25 ml	←製品番号をクリック
プロティナーゼK、 リコンビナント、PCRグレード （凍結乾燥）	3115836	25 mg	←製品番号をクリック
	3115879	100 mg	←製品番号をクリック
	3115801	2 x 250 mg	←製品番号をクリック
	3115852	4 x 250 mg	←製品番号をクリック

BIOCHEMICA2003NUMBER3(No92)