RT-PCRに至適な酵素を選ぶ方法

Tips & Facts

リバーストランスクリプション ポリメラーゼチェインリアクション(RT-PCR)において考慮すべき主要な要素は、適切なリバーストランスクリプターゼの選択です。ロシュ・ダイアグノ スティックスでは、幅広い応用に至適化された様々な酵素を提供しています。これらの製品は異なる酵素的特性を持ち、どのような特殊な実験にも、最も適した 酵素を選択できます。以下の情報はそれぞれの製品の特徴を記載したもので、それぞれのアプリケーションに最適な酵素や酵素ブレンドを選択する際の一助とな るでしょう。

1ステップRT-PCRはより早い反応を提供し、コンタミネーションのリスクを低減し、感度を改良します

  Tth DNA
ポリメラーゼ
C. therm.
1ステップ
RT-PCR
システム
Titan
1チューブ
RT-PCR
システム
Titan
1チューブ
RT-PCRキット
酵素の成分 内在性のリバーストランスクリプターゼ活性を持つ熱安定性DNAポリメラーゼ C. therm. DNAポリメラーゼとTaq DNAポリメラーゼのブレンド AMVリバーストランスクリプターゼとExpand Hi-Fi酵素ブレンドの混合品
産物のサイズ 1 kbまで 3 kbまで 6 kbまで
プライミング 特異的 特異的 特異的
反応温度 55-70℃ 60-70℃ 45-60℃
RNase H活性 ++
イオン要求性 Mn2+ Mg2+ Mg2+
感度-トータルRNA ++ +++
感度-mRNA ++ +++
感度-ウイルスRNA +++
感度-二次構造の多いRNA +++
特異性 ++
正確性 ++ +++
完全長cDNA ++
修飾核酸の取込み Yes Yes Yes
キャリーオーバーの防止
(dUTP/UNG)
Yes Yes(3 kbまでのフラグメントでは第一選択肢) Yes
バッファーシステム PCRとRT-PCR用の2種類のバッファーが含まれる 1本の反応バッファーが含まれ、反応至適化用のDMSOおよびDTTもそれぞれ含まれる 1本の反応バッファーが含まれる
利点
  • 高温(95℃)でのより長いインキュベーションに耐える
  • RNase H活性が無い
  • キャリーオーバーの防止
  • GC-リッチおよび二次構造を形成するRNAの収量と特異性を改善する
  • より高い正確性
  • より長いRT-PCR産物
  • RNase H活性が無い
  • キャリーオーバーの防止
  • 最も長いRT-PCR産物:6 kbまで
  • 完全長cDNA
  • mRNAに対して最も高感度
  • 正確性が最も高い
製品の内容
  • 酵素
  • PCRバッファー(MgCl2含む)
  • RT-PCRバッファー
  • Mn(OAc)2
  • 酵素ブレンド
  • RT-PCRバッファー(MgCl2とDMSOを含む)
  • DMSO溶液
  • DTT溶液
  • 酵素ブレンド
  • RT-PCRバッファー(MgCl2とDMSOを含む)
  • MgCl2溶液
  • DTT溶液
  • 酵素ブレンド
  • RT-PCRバッファー(MgCl2とDMSOを含む)
  • MgCl2溶液
  • DTT溶液
  • dNTPミックス
  • RNaseインヒビター
  • ヒトコントロールRNA
  • コントロールプライマーミックス
  • PCRグレード水
製品番号/価格 1480014
(100 units)
←製品番号をクリック
2016338
(50回反応)
←製品番号をクリック
1888382
(25回反応)
←製品番号をクリック
1939823
(50回反応)
←製品番号をクリック
1480022
(500 units)
←製品番号をクリック
2016346
(250回反応)
←製品番号をクリック
1855476
(100回反応)
←製品番号をクリック

2ステップRT-PCRは、プライマーの選択、酵素、温度、多重転写産物分析などに最大の柔軟性を提供します。

  C. therm.
ポリメラーゼ
M-MuLVリバース
トランスクリプターゼ
Expandリバース
トランスクリプターゼ
リバース
トランスクリプターゼAMV
1st ストランドcDNA
合成キット
産物のサイズ 4 kb 10 kb 14 kb 12 kb
プライミング 特異的
oligo dT
特異的、
oligo dT、
ランダムヘキサマー
特異的、
oligo dT、
ランダムヘキサマー
特異的、
oligo dT、
ランダムヘキサマー
反応温度 55-70℃ 37℃ 42℃(50℃まで) 42℃(60℃まで)
RNase H活性 ++
イオン要求性 Mg2+ Mg2+ Mg2+ Mg2+
感度-トータルRNA ++ ++
感度-mRNA ++ ++
感度-ウイルスRNA +++
感度-二次構造の多いRNA +++ +(+)
特異性 ++ 測定せず
正確性 ++
完全長cDNA +++ ++
修飾核酸の取込み Yes Yes Yes Yes
キャリーオーバーの防止
(dUTP/UNG)
Yes 測定せず 測定せず 測定せず
バッファーシステム 1本の反応バッファーが含まれ、反応至適化用のDMSO、DTTおよびベタインもそれぞれ含まれる 1本の反応バッファーが含まれる 1本の反応バッファーが含まれ、反応至適化用のDTTも別バイアルで含まれる すべての必要な試薬が含まれる
利点
  • ウイルスや困難な(GC-リッチ)テンプレートに高感度
  • RNase H活性が無い
  • キャリーオーバーの防止
  • エンドヌクレアーゼ活性が無い
  • AMVより低いRNase H活性
  • 14 kbまでのcDNAフラグメント
  • 完全長cDNAフラグメント
  • RNase H活性が無い
  • 12 kbまでのcDNAフラグメント
  • M-MuLVよりも高い熱安定性と特異性
製品の内容
  • 酵素
  • RT-PCRバッファー(MgCl2と DMSOを含む)
  • DTT溶液
  • DMSO溶液
  • ベタイン溶液
  • 酵素
  • cDNA合成バッファー
  • 酵素
  • RT-PCRバッファー
  • DTT溶液
  • 酵素
  • cDNA合成バッファー
  • 反応バッファー
  • MgCl2
  • dNTPミックス
  • ゲラチン
  • Oligo-p(dT)15プライマー
  • ランダムプライマーp(dN)6
  • RNaseインヒビター
  • AMVリバーストランスクリプターゼ
  • コントロールNeo RNA
  • PCRグレード水
製品番号/価格 2016311
(300 units)
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1062603
(500 units)
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1785826
(1000 units)
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1495062
(500 units)
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1483188
(30回反応)
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1785834
(5000 units)
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109118
(1000 units)
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BIOCHEMICA 2003 NUMBER 1(No. 90)

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