新規のExpand High FidelityPLUS PCRシステムを用いての、高収量、高精度、キャリーオーバーコンタミネーションの防止の組み合せ

新製品コーナー

ロシュ・ダイアグノスティックスは熱安定性DNAポリメラーゼブレンドと、その関連のバッファーシステムのパイオニアで、良く知られて いるExpand High FidelityとExpand Long Template PCRシステムは、それぞれ5 kbと20 kbまでのフラグメントの増幅を保証した、初めての市販酵素ブレンドです。Expand High Fidelity^PLUS は次世代のブレンドで、Taq DNAポリメラーゼと、ロシュ・ダイアグノスティックスにより新規に分離、同定されたプルーフリーディングタンパク質より構成されています。このタンパク 質はプルーフリーディング活性を持ちますが、DNAポリメラーゼ活性自身は持っていません。

プルーフリーディングタンパク質とTaq DNAポリメラーゼの処理能力の協動は、Expand High Fidelity^PLUS 酵素ブレンドに以下の能力をもたらしました。

• 正確性の改善と共に高収量を達成
• 5 kbまでの増幅実行時に、キャリーオーバーコンタミネーションを防止するためのdUTPの取込み

これらの性質の組み合せは、High Fidelity^PLUS 酵素ブレンドを、多数のターゲットの同時増幅において、選択すべき製品とします。様々な熱安定性DNAポリメラーゼ－個別の酵素やブレンド－は、良好な収量と正確性を提供しています。しかし、High Fidelity^PLUS 酵素ブレンドのみが、5 kbまでの断片の増幅において、高収量と高い正確性を達成しています。

5kbまで、PCRの性能を拡張

High Fidelity^PLUS 酵素ブレンドは、他のサプライヤーからの4種類の製品と比較され、5 kbまでの断片の増幅において、最も高感度で特異性の高いブレンドであるとされました（図）。様々な量（ngベース）のヒトゲノムDNAが、ヒト組織性プ ラスミノーゲンアクチベーターの4.8 kbフラグメントの増幅に使用されました。生産者の推奨する反応条件に厳しく従いました。結果は、High Fidelity^PLUS が1 ngの少量のヒトゲノムDNAからでも、最高の感度と特異性、収量で作成した事を示していました。

図1．High Fidelity^PLUS酵素ブレンドと、他の4種類の市販酵素ブレンドとの比較。

クロスコンタミネーションを避け、信頼性のある結果を得る

クロスコンタミネーションは、すべての実験室において共通の問題です。今まで、キャリーオーバーの予防－dUTPの取込みとその次のウラシルDNAグリ コシラーゼによる処理－は、Taq DNAポリメラーゼで2.5 kbまでの断片でしか可能ではありませんでした。Expand High Fidelity^PLUS 酵素ブレンドは、5 kbまでの断片にdUTPを取込ませる事を可能にしました。この事が、Expand High Fidelity^PLUS 酵素ブレンドを、より長い断片の高精度、高収量の増幅においての選択すべき製品としています。

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BIOCHEMICA 2002 NUMBER 4（No. 89）