RTSアミノ酸サンプラー－特殊な標識ミックス調製用

RTS（Rapid Translation System）コーナー

はじめに

ラピッドトランスレーションシステムは、構造生物学でのアプリケーションへの、十分量のタンパク質を製造する、初めてのセルフリー発現システムです。5 mgまでのタンパク質が、RTS 500 E.coli HYキットの1 ml反応液中で作成することができます。システムのセルフリーという性質が、標識目的でのアミノ酸組成の改変を含む、反応条件の操作を可能とします。

一つかそれ以上のアミノ酸が同位体¹³Cや¹⁵Nで特異的に標識される、核磁気共鳴（NMR）スペクトロ スコピーのための標識実験を実施する可能性は、スペクトラの判断を容易かつ迅速にする大変有用なアプリケーションです。RTSアミノ酸サンプラーは、 RTSでの至適性能や最も高い簡便性のために、各々のアミノ酸ミックスの調製をサポートします。

アミノ酸サンプラー

RTSアミノ酸サンプラーは20種類のL-アミノ酸より構成され、RTS 500 E.coli HYキットでの使用に、レディー・ツー・ユースの濃度で、それぞれ供給されます。アミノ酸ミックスを安定化するために、ジチオスレイトール（DTT）が別途、キット内に供給されます。ミックスの後、溶液は至適のpHと濃度を持ち、固形のアミノ酸を秤量したり、ストック溶液を調製するより、簡便です。

ラベリングミックスの調製には、RTSアミノ酸サンプラーからの必要な未標識アミノ酸と、選択した標識アミノ酸溶液を組み合せます。各アミノ酸が個別に 供給されているため、交換するアミノ酸の選択において、最大の柔軟性が提供されます。その後、アミノ酸ミックスはRTS 500 E.coli HYキットに供給される標準のアミノ酸ミックスと置き換え、キットの試薬と共に使用されます。
RTSアミノ酸サンプラーの包装デザインは、アミノ酸を取り除いたり、ピペッティングを2回行ったりという機会を減少することで、エラーフリーのミキシングをサポートしています（図1）。

図1. RTSアミノ酸サンプラーの包装デザインは、エラーフリーのミキシングをサポートしている。

製品のアプリケーション

RTS 500 E.coli HYキットが、¹⁵N-ヒスチジンによるグリーンフルオレッセントタンパク質（GFP）を標識するために使用されました。このアミノ酸特異的標識は、セルフリータンパク質発現により達成されました。RTSアミノ酸サンプラーのアミノ酸は、ヒスチジン以外は、説明書通りにミックスされました。¹⁵N-ヒスチジン溶液は水で調製し、アミノ酸ミックスに加えました。そのアミノ酸ミックスを、RTS 500 E.coli HYキットの説明書通り使用しました。発現タンパク質は精製され、濃縮されました。HSQCスペクトラム（図2）は500 MHz NMRスペクトロメーターで計測しました。

図2. RTS500 E.coli HYキットで発現され、500 MHz NMRスペクトロメーターで計測された¹⁵N-ヒスチジン標識GFPのHSQCスペクトラム。

結論

RTSアミノ酸サンプラーは、ラピッドトランスレーションシステムでの標識実験における簡便なツールです。その理由として、

• 必要な濃度とバッファー条件でアミノ酸が供給されます。
• 標識用アミノ酸の選択において、最大の柔軟性を提供します。
• RTS500 E.coli HYキットの試薬と共に使用することで、最大の性能を発揮します。
• アミノ酸ミックスのエラーフリーミキシングをサポートします。

NMRにおける特異的アミノ酸標識は、スペクトラの判定を迅速かつ容易にします。RTSでのセルフリーによる大量タンパク質製造は、特異的標識の操作法を大きく簡便化します。

Order INFO

製品名	製品番号	包装単位	希望価格
RTS 500 コントロールユニット	3064859	1台	←製品番号をクリック
RTS 500 E.coli HYキット	3246817	1キット(2回反応)	←製品番号をクリック
	3246949	1キット(5回反応)	←製品番号をクリック
RTS 500 アミノ酸サンプラー	3262154	1キット(5回用)	←製品番号をクリック

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BIOCHEMICA 2002 NUMBER 1（No. 86）