RTSアプリケーションラボ－プロテイン・エキスプレス訪問

RTS 500（Rapid Translation System）コーナー

RTSはセルフリータンパク質発現システムとして、大きな可能性を秘めています。それは、“オープンシステム”のため、至適化の検討が 容易です。ロシュ・ダイアグノスティックスでは、RTSにおける様々なタンパク質の至適化において、（株）プロテイン・エキスプレスとライセンス契約を締 結しました。今回は（株）プロテイン・エキスプレスの会社紹介と、ロシュ・ダイアグノスティックスのプラスミド精製キット、Geno Pureシリーズで調製したプラスミドからの、RTSでのタンパク質発現の一例を紹介します。

（株）プロテイン・エキスプレス
http://www.proteinexpress.co.jp
かずさラボ：〒292-0812 千葉県木更津市矢那1688
クリエイションかずさ内
TEL. 0438-20-5091 FAX. 0438-20-5092

会社理念

卓越した総合的蛋白質発現技術を駆使し、蛋白質機能解析拠点となり、ポストゲノム創薬研究開発を事業の中核として発展する。

• B. brevisによる組換え蛋白質生産においては世界のリーダーであり続ける。
• 蛋白質発現分野でトータルコンサルティングが可能なリーディングカンパニーとなる。
• 蛋白質の機能解析のプロフェショナルベンチャーとなり、ゲノム創薬のバリューチエンのなかで、付加価値を創造する。

事業内容

ゲノム創薬シード 開発事業	ゲノム創薬プロジェクト： 創薬ターゲット遺伝子の絞込み 蛋白質機能解析による標的蛋白質の同定 創薬シードの発見 KIAAプロジェクト： プロテオーム解析ツールとしての抗体の作製 抗体を用いた蛋白質機能解析
蛋白質医薬品 開発事業	ゲノム創薬プロジェクト： 蛋白質医薬品の共同研究開発 蛋白質医薬品販売
蛋白質生産受託事業	蛋白質受託発現サービス 蛋白質受託製造サービス

Geno Pureシリーズで調製したプラスミドからの、RTSでのタンパク質発現

RTSシステムによるGFP合成反応の流れ
	プラスミド精製キットによるGFPコントロールベクターの調製
30分	試薬のセットアップ （各試薬の溶解と混合。GFPコントロールベクターの添加） 反応容器のセットアップ RTSコントロールユニットのセットアップ
24時間	GFP合成
	反応溶液の回収
	SDS-PAGE分析

図1.合成されたGFPのSDS-PAGE分析。 GFPコントロールベクターの調製には、Geno Pure プラスミドキット（ミディ、マキシ）とA社プラスミドキット（ミディ）を使用した。その詳細は上記の通り。機器と試薬キットのインストラクションマニュア ルに従って、RTS500システム（CECF法）でのGFP合成を行った。そのGFP合成反応条件は、反応温度30℃、攪拌スピード120rpm、反応時 間24時間とした。その反応液の一部（2μl）を12.5％ SDS-PAGEゲルで分離し、クマシーブルー染色した。 レーン1:分子量マーカー，レーン2：ネガティブコントロール，レ－ン3:A社プラスミドキット（ミディ），レ－ン4: Geno Pureプラスミドミディキット，レーン5: Geno Pureプラスミドマキシキット，レ－ン6:RTS500試薬キット内のコントロールGFPベクター，レーン7:分子量マーカー，レーン8:スタンダード rGFP（250ng） §結果：すべてにおいて、同程度のGFP合成が確認された。

最初は少しとまどったけど、実際使ってみると意外と簡単！

Geno Pure Kit体験談より

普通、我々にとっても新しい精製キットを試すのは戸惑いも多いものですが、実際使ってみると意外と簡単で、その所要時間も約1時間位と短時間で済み、とても使い易かったというのが、正直な感想です。 また、今回の検討実験を通して、1mlのRTS500反応系で一回あたりに必要となる5－15μgのプラスミドDNAが、Midiタイプで簡単に、再現良 く十分量を精製できたので、とても重宝しました。それは、RTSのような転写と翻訳をカップリングさせた系ではテンプレートDNAの純度が蛋白の合成量に しばしば影響を及ぼすことがあるため、高純度プラスミドDNAが必要となるからです。

モニター：小牧 久幸さん

小牧　久幸さんとかずさラボの皆さん（小牧さんは、写真向かって2列目の左側）

今回使用された製品

Order INFO

製品名	製品番号	包装単位	希望価格
Geno Pure プラスミド ミディキット	3143414	1キット (20回調製)	←製品番号をクリック
Geno Pure プラスミド マキシキット	3143422	1キット (10回調製)	←製品番号をクリック
RTS 500 コントロールユニット	3064859	1台	←製品番号をクリック

BIOCHEMICA 2001 NUMBER 4（No. 85）