Tgo DNAポリメラーゼ－プルーフリーディング活性を改善した新しい耐熱性酵素が、PCRの信頼性と特異性を高めます

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背景情報

増幅反応においてTaq DNAポリメラーゼを使用する事の大きな欠点は、プルーフリーディングや3'→5'エキソヌクレアーゼ活性の欠失です。この欠点は、塩基の取り込みミスの率を増加させ、増幅配列をクローニングなどの更なる遺伝子研究に用いる際に、有害となります。最も良く知られたプルーフリーディング活性や3'→5'エキソヌクレアーゼ活性を持つ耐熱性ポリメラーゼは、一般的にPyrococcus株から分離されたものです。これらの酵素はTaq DNAポリメラーゼよりも高い信頼性を持ちますが、しばしば特異性や感度を欠如しています。様々な修飾がこれらのPyrococcusポリメラーゼに加えられましたが、反応条件の至適化のために、煩雑で時間のかかる至適化ステップが必要とされてきました。

製品の記述

ロシュ・ダイアグノスティックスは最近、新たな酵素であるTgo DNAポリメラーゼを耐熱性古細菌であるThermococcus gorgonariusから分離し、組換え酵素として供給しています。この酵素は、他のプルーフリーディング活性を持つポリメラーゼと比べて、明瞭な優位点を持っています： →核酸配列をより正確に増幅します；Tgo DNAポリメラーゼは、平均より高い3'→5'エキソヌクレアーゼ活性を持つ高性能の5'→3' DNAポリメラーゼです。この組み合わせにより、Taq DNAポリメラーゼや他のプルーフリーディング活性を持つ市販酵素より、高い信頼性でDNA合成が可能です（表1）。

表1：Tgo、Taq、プルーフリーディングポリメラーゼのエラー率

酵素	エラー率^*	変異の頻度^**
Taq DNAポリメラーゼ	1.3 x 10^-5	5.1 %
他のプルーフリーディングポリメラーゼ	1.8 x 10^-5- 8 x 10^-7	5.1 - 0.3 %
Tgo DNAポリメラーゼ	4.9 x 10^-7	0.2 %
^KeohavongとThilly（1989）; PNAS 86, 9253に従い計算されたエラー率 ^*lacl- コロニーの率

→特異的で連続した増幅結果が得られます；Tgo DNAポリメラーゼは、3 kbまでのフラグメントを時間のかかる至適化を必要とせず、特異的に増幅することが可能です（図1）。

図1.1ユニットのTgo DNAポリメラーゼを使用し、200 ngのヒトゲノムDNAから4種類の長さのフラグメントを増幅。

→平滑末端産物は直接増幅に使用できます；時間のかかる末端の前処理が必要ありません。
→経済的なポリメラーゼです；Tgo DNAポリメラーゼの至適なユニット数は、反応に用いるテンプレート量に応じて、0.4から1.25ユニットです。0.4ユニットの少なさで、5 ngのゲノムDNAからの1.1 kbコラーゲンフラグメントの増幅に使用できます。これにより、アッセイの効率や特異性を減らすことなく、経済的に使用できます。

ロシュ・ダイアグノスティックスではPCRとRT-PCRに様々な酵素、試薬、システムを提供しています。完全な概略を、以下のPCR特別サイトでご覧ください。

http://biochem.roche.com/pcr

Order INFO

製品名	製品番号	包装単位	希望価格
Tgo DNAポリメラーゼ (Tgo 反応バッファー添付)	3186172	50回反応	近日発売
	3186202	100回反応	近日発売
	3186199	250回反応	近日発売

BIOCHEMICA 2001 NUMBER 3（No. 84）

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