ライトサイクラー パルボウイルス B19定量キット －ウイルスゲノム定量の新しいツール

ライトサイクラー／MagNA Pure LC コーナー

背景情報

ヒトパルボウイルス B19は通常あまり深刻な病気ではない、一般的な幼児感染症であるFifth Disease（Erythema infectiosum）の原因となります。感染の活性期には、ウイルスの力価は10⁴個ゲノム相当（geq）/mlにまで達します。パルボウイルス B19は殻の無いDNAウイルスで、ウイルス不活化法のモデル生物となります。

製品の記述

伝染病学や、ヒトパルボウイルス B19の伝染と不活化における研究をサポートするために、また品質管理法を確立するために、ライトサイクラーの新しいキットが開発されました。このキットはウイルス核酸を幅広いダイナミックレンジ（10⁶-10²geq/反応）で定量し、低濃度での検出も可能としています。本キットは国際標準（WHO；NIBSC）で較正されています。

実験データ

未知の力価のパルボウイルス B19 DNAを持つ、200μlのサンプル（血清あるいは血漿）をMagNA Pure LCインスツルメントと、MagNA Pure LCトータル核酸アイソレーションキットで抽出しました。

図1. 106-102geq/反応の範囲で10倍希釈したパルボ B19 DNAスタンダード系列、MagNA Pure LCで抽出した血清、血漿サンプルをライトサイクラー パルボウイルスB19定量キットとインスツルメントで分析した。パルボB19 DNAはチャンネルF2（A）、内部コントロールはチャンネルF3（B）。

溶出液の20分の1（5μl）を、インスツルメントとライトサイクラー パルボウイルス B19定量キットによるデュアルカラーPCRで分析しました。パルボ B19 DNAはチャンネルF2で検出し（図1A）、内部コントロール（IC）はチャンネルF3で検出しました（図1B）。ICは阻害のコントロールとして働き、 サンプル自体が低い陽性や陰性結果の時のみ、陽性となります（例、サンプル6573）。高い陽性サンプルでは、ICは較正効果のため陽性シグナルを与えま せん（例、サンプル2208）。

特長と利点

• 本キットは外部スタンダードカーブを介しての定量を採用していますので、信頼できる結果が得られます。スタンダードカーブは、ライトサイクラーソフトウェア V3.5によりオプションで保存できますので、キットの経済性が増加します。
• キットには品質管理のための均一な内部コントロール（IC）が組み込まれていますので、結果の信頼性を最大にします。つまり、各結果は増幅の阻害や失敗をが除かれ、個別に検証されます。
• キットの内部コントロールと高感度が貯蔵法の評価を可能とします。

Order INFO

BIOCHEMICA 2001 NUMBER 3（No. 84）