New !! ファストスタートTaq DNAポリメラーゼ －PCR製品群がますます充実

ホットスタートPCRにおいて、増幅は高い温度に達するまで進みません。これは望みの産物の増幅を容易にし、プライマーダイマーのような非特異的産物の増幅を最小限にします。この結果、ホットスタートPCRは標準的なPCRに比べ、大きな特異性の増加をもたらします。

高い温度まで増幅を遅延させるために、以下の方法でホットスタートが行われます。

▲最初にポリメラーゼと他のPCR構成分を分離するワックス層や粒子を使用し、高温になって融解します。

▲ポリメラーゼとその抗体を組み合わせ、高温で抗体が機能しなくなるまでポリメラーゼ/テンプレート結合を予防します。

▲最初の変性ステップまで、ポリメラーゼあるいはMg²⁺の添加を遅らせます（マニュアルホットスタート）。

▲最初の変性ステップの高温で活性化する化学修飾ポリメラーゼを選択します。

これらの方法の内、最初の3つは反応のセットアップで余分な操作を必要とし、PCRマスターミックスの利点が損なわれます。時間、取り扱い、労力などの増加が必要とされる事は、1日に多くの増幅を行う研究室においては、特に問題となります。第4の方法で使用される化学修飾ポリメラーゼは、新たな操作を必要とせず、増幅の最初のラウンドの前に10-15分間のインキュベーション時間を必要とするだけです。新たな操作を必要とする他の3つの方法と同様、多くの反応を毎日行わなければならない時には、このインキュベーション時間の延長はホットスタート法の特異性の利点を相殺します。

ファストスタートTaq DNAポリメラーゼは、特異性とホットスタートの簡便性を、最大限にします。

新しいファストスタートTaq DNAポリメラーゼは、初期のインキュベーション時間を最小限にすると同時に、ホットスタートPCRの特異性を最大限にします。この酵素はホットスタートPCR用に特にデザインされた、熱安定性の化学的に修飾したリコンビナントのTaq DNAポリメラーゼです。この酵素の性質は、

▲75℃まで不活性のため、非特異的産物を低い温度で増幅しません。それゆえ、ワックス層や粒子、マニュアルホットスタートの使用を除外でき、また氷上でのPCRセットアップの必要もありません。

▲95℃の最初のインキュベーションにおいて、他の化学修飾ポリメラーゼで必要な10-15分ではなく、2-4分で活性化されます。

それゆえファストスタートTaq DNAポリメラーゼは、ホットスタートの特異性と使いやすさという完全なバランスを提供し、すべてのシステムの中で、最も特異的な結果を生み出します（図1）。

ファストスタートTaq DNAポリメラーゼは、ルーチン、マルチプレックス、ネステッド、ハイスループット及び3 kbまでの産物の複雑なゲノムPCR増幅において、優れた結果を保証します。この信頼性のある酵素をいろいろなアプリケーションでご使用ください（表1）。

• 3 kbまでのゲノムDNAとcDNAターゲットの増幅
• マルチプレックスPCR
• 困難なテンプレートの増幅（GC-リッチシークェンス、高い二次構造）
• キャリーオーバーの防止
• 全自動PCRやハイスループットPCR
• 定量PCR（ライトサイクラーなど）
• 低コピー遺伝子の検出

表1. ファストスタートTaq DNAポリメラーゼのアプリケーション

ファストスタートTaq DNAポリメラーゼは、高い酵素活性と至適バッファーが結びついています。一緒に使用する事で、1コピー遺伝子の増幅においても高い感度と高収量増幅をもたらします（図2）。この標準的なバッファーに加え、ファストスタート ポリメラーゼにはGC-リッチ高分離能バッファーも添付されています。GC-リッチシークェンスや高い二次構造を持つ、最も困難なテンプレートの問題を克服するために、この高分離能バッファーを使用してください（図3）。

まとめると、ファストスタートTaq DNAポリメラーゼはホットスタートアプリケーションにおいて、優れた結果をもたらします。他のホットスタートシステムで要求される、余分な作業ステップや長いインキュベーション時間を必要とせず、ホットスタートPCRの増強された特異性を保証します。

テンプレート/開始材料に対して最も適切な説明はどれですか？	ロシュ・ダイアグノスティックスのPCR製品の選択
	DNAテンプレート	RNAテンプレート
ルーチン、複雑なゲノム、ホットスタートPCRで最大の特異性が必要。	ファストスタートTaq DNAポリメラーゼ	C. therm. DNAポリメラーゼ + ファストスタートTaq DNAポリメラーゼ
開始材料が少ないので、最大の感度が必要。	High Fidelity PCRマスター Expand High Fidelity PCRシステム	Titan 1チューブRT-PCRシステム／キット
テンプレートの増幅が困難（高い二次構造、高GC含量、夾雑物質を含む）なので、タフな酵素が必要。	GC-リッチPCRシステム	1．C. therm. DNAポリメラーゼ + GC-リッチPCRシステム ２．C. therm. DNAポリメラーゼ + Expand High Fidelity PCRシステム
長いテンプレート（5 kb以上）を使用しているので、産物の長さが重要。	ExpandロングテンプレートPCRシステム Expand 20 kbPLUSPCRシステム	AMVリバーストランスクリプターゼ + ExpandロングテンプレートPCRシステム
テンプレートの特異的な核酸配列を研究しているので、最高の正確性が必要。	Pwo DNAポリメラーゼ	Titan 1チューブRT-PCRシステム／キット
多くの種類のテンプレートとプライマーを使用し、過程を合理化したいので、最大の簡便性を求めている。	High Fidelity PCRマスター PCRマスター	Titan 1チューブRT-PCRシステム／キット
同一ターゲットを繰り返し増幅しているので、キャリーオーバーの防止が必要。	PCRコアキットPLUS PCRヌクレオチドミックスPLUS＋ウラシルＤＮＡグリコシダーゼ	C.therm.DNAポリメラーゼ＋1ステップRT-PCRシステム＋dUTP＋ウラシルDNAグリコシダーゼ
多数のルーチン反応を行っているので、矛盾の無い信頼の置ける結果が必要。	TaqDNAポリメラーゼ	AMVリバーストランスクリプターゼ＋Taq DNAポリメラーゼ ファーストストランドcDNA合成キット(AMV)＋Taq DNAポリメラーゼ

表２．特殊なテンプレートと増幅に適した製品

 

Order INFO

製品名	製品番号	包装単位	希望価格
ファストスタート Taq DNAポリメラーゼ	2158264	50 units（25回PCR反応）	¥70,000
	2032902	1000 units（50回PCR反応）	¥11,400
	2032929	2x2500 units（250回PCR反応）	¥50,000
	2032937	4x2500 units（500回PCR反応）	¥98,000
	2032945	10x2500 units（1250回PCR反応）	¥207,500
	2032953	20x2500 units（2500回PCR反応）	¥375,000