Anti-HA アフィニティマトリックス－リコンビナントタンパクの分離・精製に

新製品コーナー

低発現量のHA-タグ リコンビナントタンパク質の検出

新製品のAnti-HA アフィニティマトリックスを用いる事で、タグ リコンビナントタンパク質を高感度でしかも特異的に精製する事が出来ます。この抗体(クローン 3F10)は、ヒトインフルエンザ・ヘマグルチニン(HA)タンパク質の9-アミノ酸配列を、最も高い親和性で認識します。

Anti-HA アフィニティマトリックスは、哺乳類細胞、酵母、バクテリア細胞の抽出物からHA-タグタンパク質を免疫沈降させたり、アフィニティ精製するために使用されます。免疫沈降や精製に続き、ウェスタンブロットやシルバーステインでタグタンパク質を分析します。

図1.HAタグホスフォリパーゼA(37 kD)の弱い発現を示す、ステーブルなトランスフェクト、マウスIa細胞のライセート(トータルプロテイン1 mg/ml)のウェスタンブロット。

レーン1：免疫沈降前に2：1に希釈

レーン2：免疫沈降前に1：8に希釈

レーン3：免疫沈降前に1：32に希釈

Anti-HA アフィニティマトリックスで可能な事：

• HAタグ融合タンパクへの迅速な結合
• 低発現タンパク質の検出(図3)
• バクテリア、哺乳類細胞、酵母の発現システムでのバックグランドの除去(図4)
• 煩雑で時間のかかる至適化ステップが避けられる

Anti-HA ハイアフィニティ抗体の特異性と感度

ロシュ・ダイアグノスティックスでは、エピトープタギングに必要な試薬を幅広く提供しています。新製品のAnti-HA ハイアフィニティ抗体(クローン 3F10)には、ビオチン、フルオレセイン、PODを標識したものも発売されます。

• POD標識Anti-HA、ハイアフィニティ
  直接検出により、ウェスタンブロットにおいてイムノグロブリンの結合とバックグランドを回避します。
• フルオレセイン標識Anti-HA、ハイアフィニティ
  ワンステップフローサイトメトリーが行え、細胞のバックグランド染色を減少させ、細胞内の局在の感度を上げます。
• ビオチン標識Anti-HA、ハイアフィニティ
  ウェスタンブロットや免疫組織染色での、2種類の抗原の同定に使用します。検出系は広い範囲で、酵素および蛍光標識ストレプトアビジンが選べます。

製品名	製品番号	包装単位
Anti-HA、アフィニティマトリックス	1815016span lang=EN-US style='font-family:HGPｺﾞｼｯｸM'>	1.0 ml
Anti-HA、ハイアフィニティ(3F10)	1867423 1867431	50μg 500μg
POD標識Anti-HA、ハイアフィニティ(3F10)	2013819	25 U
フルオレセイン標識Anti-HA、ハイアフィニティ(3F10)	1988506	50μg
ビオチン標識Anti-HA、ハイアフィニティ(3F10)	2158167	50μg
関連製品名	製品番号	包装単位
pHB6 バクテリア発現ベクター(N-HA+His6-C)	1814575	20μg
pBH バクテリア発現ベクター(HA-C)	1814605	20μg
pHM6 哺乳細胞発現ベクター(N-HA+His6-C)	1814664	20μg
pMH 哺乳細胞発現ベクター(HA-C)	1814702	20μg
Anti-HA(12CA5)	1583816 1666606	200μg 5 mg/1 ml
POD標識Anti-HA(12CA5)	1667475	50μg (500μl)
マルチ-タグ マーカー	1828649	250 μl
Lumi-LightPLUSPOD ウエスタンブロッティング キット(マウス/ウサギ)	2015218	1000 cm2 メンブレン
Complete, (プロテアーゼインヒビターカクテル錠)	1697498	20錠

迅速でシンプルなフォーマット

Luc- Screenは、ハイスループットスクリーニングに最適な、便利で使いやすいルシフェラーゼアッセイシステムです。このシステムには、マイクロタイター上 の培養液中の細胞に加える、2種類の試薬が含まれ、フェノールレッドの有無に関わらず使用できます。最初の10分間のインキュベーションで細胞が溶解さ れ、この間に光シグナルはプラトーに達します。発光シグナルは4－5時間の半減期で持続するため、試薬の添加から測定までに十分な時間の余裕があります。

Luc-Screenを用いたレポータージーンアッセイ

高感度で広いダイナミックレンジ

ホタルルシフェラーゼは、もっとも高感度なレポーター酵素の一つです。Luc－Screenシステムでは50 fg以下のルシフェラーゼでも検出できます。高感度なだけでなく広いダイナミックレンジで測定できます。Luc－Screenシステムでは50 fgから100 ngの間で直線的なシグナルが得られます。ダイナミックレンジは6桁以上です。

Luc－Screen の感度を示します。精製ルシフェラーゼの希釈系列をDMEMで調製し、Luc－Screenを用いてアッセイを行いました。TR71マイクロプレートルミ ノメーターで、ウェル当たり0.1秒間シグナルを測定しました。Luc0Screenの6桁以上(50 fgから100 ng)にわたるダイナミックレンジが示されています。

	製品名	製品番号	包装単位
Luc-Screen	LS200 LS1000	200回反応 1000回反応

迅速でシンプルなフォーマット

Gal- Screenは、基質をバッファーA(哺乳類細胞用)あるいはB(酵母用)に加えるだけで、細胞溶解から反応までのすべての成分を含む、試薬溶液が調製で きます。後は、96ウェルあるいは384ウェル上の培地中の細胞に等量加えインキュベーションするだけです。その後、ルミノメータで発光を測定します。

　　　Gal-Screenのフォーマット

Gal-Screen^TMアッセイのカイネティックス

Gal- ScreenアッセイはΨ2-BAGα細胞(β-ガラクトシダーゼの発現を構築した安定トランスフェクションNIH/3T3細胞、10,000細胞/ウェ ル)及び、トランスフォーム酵母細胞(Gal4 WT; 23,000細胞/ウェル)を用いて行われた。Ψ2-BAGα細胞は反応バッファーAとBで分析、酵母細胞は反応バッファーBで分析した。プレートは TR717マイクロプレートルミノメーターで繰り返し測定される間27℃でインキュベーションされた。データは最大発光シグナルうに対する%で表示。

高感度で広いダイナミックレンジ

Gal-Screenは1 pgのβ-ガラクトシダーゼ(培地中)を検出し、他のレポータージーンアッセイシステムに比べ優れた感度を示します。ダイナミックレンジも5桁のワイドレンジを持っています。

	製品名	製品番号	包装単位
Gal-Screen(哺乳類細胞用)	GSM200 GSM1000	200回反応 1000回反応
Gal-Screen(酵母用)	GSY200 GSY1000	200回反応 1000回反応

ワンステップイースト（酵母）用溶解剤

上記Gal-Screen（酵母用）中のワンステップ溶解剤を別売しております。

	製品名	製品番号	包装単位
One-Step Yeast Lysis Buffer	ABX150LD	150 ml (1800MTPアッセイ)

cAMP- Screenイムノアッセイキットは、細胞溶解液中のcAMP濃度を高感度で測定します。このシステムは競合イムノアッセイを利用し、マニュアルにも、自 動化されたハイスループットスクリーニングにも対応できる、柔軟なシステムです。cAMP-Screenアッセイで採用されている化学発光検出は、最も高 感度で広いダイナミックレンジを持ち、60フェムトモルから6ナノモルまでのcAMP量を、サンプルの希釈やアセチル化などの処理をせずに測定できます。

　cAMP-Screenアッセイフォーマット

キット内容(192回用と960回用)

1.アッセイ/溶解バッファー	25 ml/2 x 65 ml
2.スタンダードストック溶液	2 ml/2 x 5 ml
3.抗cAMP抗体	14 ml/2 x 35 ml
4.AP標識cAMP	100μl/2 x 250μl
5.標識物希釈バッファー	10 ml/2 x 25 ml
6.洗浄バッファー	500 ml/2 x 1000 ml
7.CSPD/Sapphire II ready-to-use	25 ml/2 x 65 ml
8.コート済み96ウェルプレート	2プレート/10プレート

	製品名	製品番号	包装単位
cAMP-Screen	CS200 CS1000	192回反応 960回反応

プロベリア(PROBELIA)は、SANOFI DIAGNOSYTICS PASTEUR社のPCR-食品テストキットで、下記の原理で微生物の存在を検出します。

[原理図]

プロベリア^TMサルモネラ キット

	製品名	製品番号	包装単位	希望価格
サルモネラ遺伝子増幅キット サルモネラ検出キット	489915 489922	96テスト 96テスト	\98,000 \50,000
Salmonella属検出用試薬	NEW

背景

Salmonella属による食中毒の発生状況はここ数年増加しています。その原因となる食材は、生卵と卵加工品、食肉が主なものです。Salmonella属の血清型は、2,000以上ある事が確認されており、潜在的にその全てが、ヒトに対して病原性を持ちます。

PCR法によるプロベリア^TMサルモネラ キットでの検査結果は、増菌培養後24時間以内に得られ、他法と比較して検出感度も良好で、多数検体の検査も容易です。またPCR反応を阻害する物質の存在を確認するため、内部コントロールを平行して測定する事で、偽陰性効果を知る事が出来ます。

キットの内容

1. サルモネラ遺伝子増幅キット

	試薬	試薬名	包装
A1	遺伝子抽出試薬	22 ml x 1ボトル
A2	遺伝子増幅試薬	2.5 ml x 4チューブ
A3	PCR陽性コントロール	0.5 ml x 1チューブ
A4	PCR陰性コントロール	1.0 ml x 1チューブ
A5	タンパク質変性試薬	12 ml x 1ボトル

2. サルモネラ検出キット

	試薬	試薬名	包装
H0	内部コントロール特異プローブ固相マイクロプレート	8ウェルx12ストリップ
H1	サルモネラ遺伝子特異プローブ固相マイクロプレート	8ウェルx12ストリップ
H2	ハイブリダイゼーション緩衝液	100 ml x 1ボトル
H3	POD標識サルモネラ/内部コントロール特異プローブ	0.3 ml x 1チューブ
H4	洗浄液、x10	100 ml x 1ボトル
H5	基質/緩衝液	60 ml x 1ボトル
H6	発色剤	1 ml x 1ボトル
H7	反応停止液	28 ml x 1ボトル

付属品: マイクロプレート粘着フィルム(20枚)

プロベリアTMリステリア モノサイトゲネス キット	製品番号	包装単位	希望価格
リステリア モノサイトゲネス遺伝子増幅キット リステリア モノサイトゲネス検出キット	489939 489946	96テスト 96テスト	ご照会 ”
Listeria monocytogenes検出用試薬	NEW

背景

リステリア属には6種の菌が属しており、この中ではListeria monocytogenesだけがヒトに対して病原性があります。汚染された食物や水を摂取して感染しますが、肉、海産物、乳製品や野菜などが食中毒の多くの原因です。

PCR法によるプロベリア^TMリステリア モノサイトゲネス キットでの検査結果は、増菌培養後24時間以内に得られ、他法と比較して検出感度も良好で、多数検体の検査も容易です。またPCR反応を阻害する物質の存 在を確認するため、内部コントロールを平行して測定する事で、偽陰性効果を知る事が出来ます。

キットの内容

1. リステリア モノサイトゲネス遺伝子増幅キット

	試薬	試薬名	包装
A1	遺伝子抽出試薬	22 ml x 1ボトル
A2	遺伝子増幅試薬	2.5 ml x 4チューブ
A3	PCR陽性コントロール	0.5 ml x 1チューブ
A4	PCR陰性コントロール	1.0 ml x 1チューブ
A5	タンパク質変性試薬	12 ml x 1ボトル

2. リステリア モノサイトゲネス検出キット

	試薬	試薬名	包装
H0	内部コントロール特異プローブ固相マイクロプレート	8ウェルx12ストリップ
H1	リステリア モノサイトゲネス遺伝子特異プローブ固相マイクロプレート	8ウェルx12ストリップ
H2	ハイブリダイゼーション緩衝液	100 ml x 1ボトル
H3	POD標識リステリア モノサイトゲネス/内部コントロール特異プローブ	0.3 ml x 1チューブ
H4	洗浄液、x10	100 ml x 1ボトル
H5	基質/緩衝液	60 ml x 1ボトル
H6	発色剤	1 ml x 1ボトル
H7	反応停止液	28 ml x 1ボトル

付属品: マイクロプレート粘着フィルム(20枚)

プロベリアTM大腸菌 O-157: H7 キット	製品番号	包装単位	希望価格
大腸菌O-157: H7遺伝子増幅キット 大腸菌O-157: H7検出キット	489953 489960	96テスト 96テスト	ご照会 ”
E. coliO157:H7 検出用試薬	NEW

背景

大腸菌(Escherichia coli) O157: H7は、食中毒を起こす原因菌の1つであり、食品中の存在を迅速に感度良く検出する事が、要求されています。食品の中では牛挽肉が感染源として高い頻度を示します。

PCR法によるプロベリア^TM大腸菌 O-157: H7 キットでの検査結果は、増菌培養後24時間以内に得られ、他法と比較して検出感度も良好で、多数検体の検査も容易です。またPCR反応を阻害する物質の存 在を確認するため、内部コントロールを平行して測定する事で、偽陰性効果を知る事が出来ます。

キットの内容

1. リステリア モノサイトゲネス遺伝子増幅キット

	試薬	試薬名	包装
A1	遺伝子抽出試薬	22 ml x 1ボトル
A2	遺伝子増幅試薬	2.5 ml x 4チューブ
A3	PCR陽性コントロール	0.5 ml x 1チューブ
A4	PCR陰性コントロール	1.0 ml x 1チューブ
A5	タンパク質変性試薬	12 ml x 1ボトル

2. リステリア モノサイトゲネス検出キット

	試薬	試薬名	包装
H0	内部コントロール特異プローブ固相マイクロプレート	8ウェルx12ストリップ
H1	大腸菌O-157: H7遺伝子特異プローブ固相マイクロプレート	8ウェルx12ストリップ
H2	ハイブリダイゼーション緩衝液	100 ml x 1ボトル
H3	POD標識大腸菌 O-157: H7 /内部コントロール特異プローブ	0.3 ml x 1チューブ
H4	洗浄液、x10	100 ml x 1ボトル
H5	基質/緩衝液	60 ml x 1ボトル
H6	発色剤	1 ml x 1ボトル
H7	反応停止液	28 ml x 1ボトル

付属品: マイクロプレート粘着フィルム(20枚)