プロテインC エピトープタギングシステムの導入

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プロテインCエピトープタギングシステムは、次のことを可能にします。

• カルシウムキレーターやプロテインCペプチドを用い、穏やかな条件下および低コストでのタグタンパク質の溶出。
• ウエスタンブロットで単一バンドの純度が得られる。
• N-末でもC-末でも、一つの抗体でプロテインCタグを認識。
• 発現システムを考慮する事無く、最大の特異性を達成。
• 目的タンパクにカルシウム結合部位を導入する事無く、カルシウム依存的抗体結合が得られる。

ロシュ・ダイアグノスティックスのプロテインCエピトープタギングシステムは、高い特異性と純度でタグ融合タンパク質を迅速に精製できる、ユニーク なシステムです。このエピトープタグは、トロンビン－トロンボモジュリン複合体による切断により活性化される、ビタミンK依存性血漿酵素であるプロテイン Cより派生しています。Anti-プロテインC(クローン HPC4)はプロテインCの重鎖の12アミノ酸を認識します。このシステムでは、Ca^2＋の存在下でのみ、高い親和性と特異性 で結合します。カルシウムのキレーションは生理的条件と同様のバッファー条件を使用して、融合タンパクを穏やかに、また低コストで溶出できます。この性質 により、この抗体は特に組換え融合タンパク質のアフィニティ精製に適しています。またペプチドによる溶出法も用意されています。他のCa^2＋依存的発現、精製システムに比較し、プロテインC／Anti-プロテインCエピトープタギングシステムは、特にイムノアフィニティ精製のアプリケーションに有用です。

図1.クルードなバクテリア抽出物からの、プロテインCタグβ-ガラクトシダーゼの精製。ウエスタンブロットによる。
0.5 mlのAnti-プロテインC アフィニティマトリックス カラムを3 mgの総タンパク質の精製に用いた。1A:N-末端、1B:C-末端。
レーン1:クルードなバクテリア抽出物
レーン2:カラムを通したもの
レーン3:精製タンパク質

図2. クルードなバクテリア抽出物からの、プロテインCタグβ-ガラクトシダーゼの精製。銀染色による。
0.5 mlのAnti-プロテインC アフィニティマトリックス カラムを3 mgの総タンパク質の精製に用いた。2A:N-末端、2B:C-末端。
レーン1:分子量マーカー
レーン2と5: クルードなバクテリア抽出物(総タンパク質量1μgをロード)
レーン3-6:カラムを通したもの(総タンパク質量1μgをロード)
レーン4と7:精製タンパク質(総タンパク質量100 ngをロード)

プロテインCシステムには、色々な製品が含まれます。

　

Anti-プロテインC

• N-末と同様、C-末でもプロテインCタグを認識。
• 高親和性の抗体により、特異的な検出を達成。

Anti-プロテインC アフィニティマトリックス

• N-末、C-末タグタンパク質を精製。
• カルシウム依存的溶出による穏やかで、迅速な精製。
• 単一バンドの純度を達成。
• カラムおよび免疫沈降フォーマットが選択できる。

POD標識Anti-プロテインC

• 直接検出によるバックグランドの除去。
• 時間、操作ステップの減少。

プロテインCタギングベクター

• N-末端、C-末端融合産物を産生。
• 各ベクターに添付のコントロールで、発現システムのチェックが可能。

製品名	製品番号	包装単位
Anti-プロテインC	1814508 1814516	200 μg 5 mg(1 ml)
POD標識Anti-プロテインC	1814974	1 ml
Anti-プロテインC アフィニティマトリックス	1815027	20 μg
pBX バクテリア発現ベクター(N-末端)	1814591	20 μg
pBX バクテリア発現ベクター(C-末端)	1814621	20 μg
pXM 哺乳細胞発現ベクター(N-末端)	1814699	20 μg
pMX 哺乳細胞発現ベクター(C-末端)	1814737	20 μg
関連製品名	製品番号	包装単位
FuGENE 6 トランスフェクション試薬	1814443 1815091 1815075	1 ml 0.4 ml 5 x 1 ml
POD標識Anti-マウス IgG[H+L]	1814168	1 ml
Lumi-LightPLUS POD ウエスタンブロッティング キット(マウス/ウサギ)	2015218	1000 cm2 メンブレン
Complete, EDTAフリー (プロテアーゼインヒビターカクテル錠)	1873580	20錠
Complete, ミニ、EDTAフリー (プロテアーゼインヒビターカクテル錠)	1836170	25錠
マルチ-タグマーカー	1828649	250μl