ミニ クイックスピンカラム-標識核酸から未取込みヌクレオチドを簡単、迅速に除去する方法

2 TIPS and FACTS

Key Words：ミニ クイックスピンカラム、標識やシークエンス反応のための未取込みヌクレオチドの分離

クイックスピンカラム製品は、エタノール沈殿やポリアクリルアミドゲルによる分離、有機溶媒による抽出などの、時間のかかる従来法に代わるものです。これ らの製品はゲルろ過法をスピンカラムフォーマットに応用したもので、標識反応よりの未取込みヌクレオチドの除去を含むさまざまなアプリケーションに使用さ れています。

新製品のミニクイックスピンカラムは、標準的なマイクロ遠心機に装着出来るタイプで、従来製品と同等の性能(高回収率、使いやすさ)を示します。

ミニクイックスピンカラムDNA、RNAとオリゴカラムは、すでに水酸化されたセファデックス^® マトリックスを充填していますので、ready-to-useで、全行程は7分で済み、実際の操作時間も2分しか必要としません。すでに平衡化されたマト リックスはまたドリップカラム法で起こり得るサンプルの希釈を防ぎます。このマイクロ遠心機に装着できるタイプはスイングバケットローターを必要としませ ん。また使い捨てでスナップオフ-チップを持つタイプですので汚染からも安全です。

図1.ミニクイックスピンカラムDNAとオリゴカラムを用いての、5'-エンドラベルオリゴよりの未取込みRI標識ヌクレオチドの除去。

8から32ベースのさまざまな長さのオリゴマーをDNA 5'-エンドラベリングキットとγ³²P-ATPで標識した。その後サンプルをミニクイックスピンカラムDNA(レーン2と3)とオリゴカラム(レーン6と7)で精製した。分離したサンプルの1/5を20%アクリルアミドゲルで電気泳動した。ゲルをプラスチックラップに包み、ルミフィルム ルミネッセントデテクションフィルムに18時間露光した。

レーン1:標識オリゴマーカーコントロール
レーン2,3:ミニクイックスピンカラムDNAで精製した標識オリゴマーカー
レーン4:ブランク
レーン5:標識オリゴマーカーコントロール
レーン6,7:ミニクイックスピンオリゴカラムで精製した標識オリゴマーカー
レーン8:ブランク
レーン9: 標識オリゴマーカーコントロール

　

	ミニクイックスピンDNAカラム	ミニクイックスピンRNAカラム	ミニクイックスピンオリゴカラム
カラム内容	1x STEバッファー中にセファデックス® G-50が充填	1x STEバッファー中にセファデックス® G-50が充填	1x STEバッファー中にセファデックス® G-25が充填
サンプル量	25-75μl	25-75μl	25-50μl
回収率	≧90% (ニックトランスレーションpBR322)	≧80% (pST18-neo DNA のSP6転写産物)	≧80% (5'-エンドラベルオリゴヌクレオチド)
保持率	≧99%	≧99%	≧99%
排他限界	20 bp	20 ベース	8 ベース
ヌクレアーゼ試験	DNase不含	DNase,RNase不含	DNase不含
応用	RI標識プローブよりの未取込みdNTPsの除去;蛍光標識DNAよりのダイターミネーターの除去	RNAプローブよりの未取込みNTPsの除去	エンドラベルオリゴヌクレオチドよりの未取込みdNTPsの除去

表1.ミニクイックスピンカラムの特徴。

　

詳報はこちらへ http://biochem.roche.com/Prod_inf/Biochemi/No1_99/B199noet.htm

　

製品名	製品番号	包装単位
ミニクイックスピンDNAカラム	1814419	50カラム
ミニクイックスピンRNAカラム	1814427	50カラム
ミニクイックスピンオリゴカラム	1814397	50カラム
DNA 5’-エンドラベリングキット	702757	10回反応