New! 化学発光基質(POD) Lumi-Light とLumi-LightPLUSウェスタンブロッティング基質、 Lumi-LightPLUS ウェスタンブロッティング キット(マウス/ウサギ)

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ウェスタンブロッティングは特異的タンパク質(抗原)の同定に大変有用なテクニックであり、化学発光基質の使用により高感度を得られるようになりま した。今回ロシュ・ダイアグノスティックスではルミノール／ヨードフェノールに代わる、ペルオキシダーゼの次世代化学発光基質であるLumi-Light とLumi-Light^PLUSを新発売致します。

図1. Lumi-Light基質によるブロットされた抗原の化学発光検出。

1. 抗原がメンブレンにブロットされる。
2. 一時抗体が固相化された抗原に結合。
3. POD標識種特異二次抗体が一時抗体に結合。
4. PODがLumi-Light基質を変換し、発光させる。
5. 光はX-線フィルムやLumi-Imagerへの露光で検出される。

感度(Sensitivity)

Lumi-Light^PLUSでサブピコグラムのタンパク質が検出できます。この驚異的な感度により、希少な抗原の可視化が可能になり、二次抗体の節約にもなります。Lumi-Lightでは10－50 pgのタンパク質を検出し、高感度を必要とするスタンダードな応用に適しています。他の市販基質との比較を図2.に示しました。Lumi-Light とLumi-Light^PLUSはX-線フィルムやLumi-Imagerへの露光前、30分のインキュベートで増強されています。ルミノール／ヨードフェノールではシグナルの増強が、提供されません。

図2.基質インキュベーション後、直ちに(0時間)ウエスタンブロットでそれぞれの化学発光POD基質を比較した。β-ガラクトシダーゼ(1 pg, 5 pg, 10 pg, 50 pg, 100 pg, 1 ng)をSDS-PAGEで分離し、PVDFメンブレンにブロットした。このブロットを3μg/mlの抗β-ガラクトシダーゼおよび50 mU/mlの抗マウス IgG-PODとインキュベートした。基質とのインキュベーション直後に、10分間露光した。

シグナルの安定性(Signal stability)

Lumi-Light^PLUS (12時間以上)とLumi-Light(3時間以上)の長時間安定な発光により、1つの実験で多重露光が可能となります(図3と4)。従来のルミノール ／ヨードフェノールではシグナルは1-2分で最大強度に達し、30分以内に減衰します。基質のインキュベーション後、1時間の残存強度は60-70%に過 ぎません。

図3. 基質インキュベーション12時間後、ウエスタンブロットでそれぞれの化学発光POD基質を比較した。条件は図2と同様。基質とのインキュベーション12時間後に、10分間露光した。

　

図4.Lumi-Lightのタイムコース。Lumi-Imager™で分析された、典型的なウェスタンブロットとLumi-LightPLUS(A)とLumi-Light(B)のシグナル(RLU)。

簡便性(Convinience)

Lumi-Light^PLUS ウェスタンブロッティング キット(マウス/ウサギ)は、ウェスタンブロットに必要なすべての試薬を含むため、高感度な抗原検出が簡便になりました。抗マウス Ig-PODと抗ウサギ Ig-POD Fab フラグメント、ブロッキング試薬、10 x TBSTバッファー、Lumi-Light^PLUSエンハンサー、Lumi-Light^PLUS基質です。Lumi-Light^PLUS とLumi-Lightはルミノール/特殊なエンハンサー、安定な過酸化物の溶液より構成されています。これら2つの成分を1:1に混合すると、室温で24時間安定な基質溶液が調製できます。これにより貴重な基質が無駄になりません。

化学発光イメージングシステムとの互換性

(Compatibility with Chemiluminescent imaging systems)

Lumi-Light やLumi-Light^PLUS とLumi-Imagers™は、化学発光ウェスタンブロットの可視化および定量、分析にパーフェクトな組み合わせです。高性能CCDカメラにより短時間の露光でも最高感度でイメージングが出来、真の定量が可能となります。

製品	Lumi-Light	Lumi-LightPLUS	BM Chemiluminescence Western Blotting Substrate
基質	Luminol + 特別なエンハンサー	Luminol + 特別なエンハンサー	Luminol + 4-ヨードフェノール
感度	10-50 pgの抗原	< 1 pgの抗原	< 10 pgの抗原
シグナルの安定性	> 3時間。30分のインキュベーションによりシグナルは増強される。	> 12時間。30分のインキュベーションによりシグナルは増強される。	約30分間。1-2分でシグナルの最大に達する。1時間後には初期強度の60-70%となる。
推奨されるメンブレン	PVDFとニトロセルロース	PVDFとニトロセルロース	PVDFとニトロセルロース
他の成分			ブロッキング溶液が含まれる。

　

　

製品名	製品番号	包装単位
Lumi-Light ウェスタンブロッティング基質	2015200	400 ml(4000 cm2)
Lumi-LightPLUS ウェスタンブロッティング基質	2015196	100 ml(1000 cm2)
Lumi-LightPLUS ウェスタンブロッティング キット(マウス/ウサギ)	2015218	1 kit(1000 cm2)
関連製品名	製品番号	包装単位
Lumi-Imager	1901800	1 台
PVDF ウェスタンブロット メンブレン	1722034 1722026	10シート(15x15 cm) 1ロール(26.5 cm x 3.75 cm)
ブロッキング試薬、粉末	1096176	50 g
ブロッキング試薬、溶液	1921673 1921681	100 ml(10ブロット) 6x100 ml(60ブロット)
Anti-mouse IgG-POD, Fab fragment	1500686	120 U
Anti-mouse Ig-POD, Fab fragment	1172808	40 U
Anti-rabbit IgG-POD, Fab fragment	1238850	200 U
BM chemiluminescence Blotting Substrate (POD)	1500708 1500694	1セット(1000 cm2) 1セット(4000 cm2)
Lumi-Filum Chemiluminescent Detection Film	1666916 1666657 1666711	100フィルム (18 x 24 cm) 100フィルム(20.3 x 25.4 cm) 100フィルム (35 x 43 cm)
BM Chemiluminescence Western Blotting Kit (Mouse/Rabbit)	1520709	1 kit(2000 cm2)