カテゴリ
- No.118
- No.117
- No.116
- No.115
- No.114
- No.113
- No.112
- No.111
- No.110
- No.109
- No.108
- No.107
- No.106
- No.105
- No.104
- No.103
- No.102
- No.101
- No.100
- No.99
- No.98
- No.97
- No.96
- No.95
- No.94
- No.93
- No.92
- No.91
- No.90
- No.89
- No.88
- No.87
- No.86
- No.85
- No.84
- No.83
- No.82
- No.80
- No.77
- No.76
- No.75
- No.74
- No.73
- No.72
- No.71
- TOPへ
顧客サポート
学術的なご相談、資料請求、機器サポートなど、お客様のさまざまなニーズに対応します。
FuGENETM 6トランスフェクション試薬を用いてのHepG2細胞の効率的トランスフェクション
2 TIPS and FACTS
Key words: hFIX, hemophilia B, co-transfection, FuGENETM Reagent
ヒトの血液凝固第IX因子(hFIX)は血友病Bに関与する重要な凝固因子で、X染色体に存在します。またその発現は高度に肝細胞特異的です。 HepG2細胞(ヒト肝臓腫瘍細胞株)は、肝臓特異的遺伝子の発現や調節の研究に繁用されますが、トランスフェクション効率が低いとの問題がありました。 高効率のリン酸カルシウム法はBHKやCOS細胞では20%以上の効率を持ちますが、HepG2細胞ではわずかに5-7%しかありません。今回リン酸カル シウム法と、L-plus(リーディングサプライアーL)及びFuGENE 6 トランスフェクション試薬(ロシュ・ダイアグノスティックス)を用いて、そのトランスフェクション効率を比較しました。発現ベクターは、SV40プロモー ターを持ちバクテリアのβ-ガラクトシダーゼの発現とヒト第IX因子ミニジーンを誘導するpCH110を含みます。hFIXのトランスフェクションのテス トにはhFIXミニジーン発現ベクターp-416FIXm1とpCH110をコ-トランスフェクトしました。
結果
|
トランスフェクション法 |
トランスフェクション効率、β-Gal染色細胞(DNA トランスフェクション) |
hFIX発現、ELISAによるタンパク量／60 mmプレート(DNAトランスフェクション) |
|
高効率リン酸カルシウム法 |
5-7 % (4μg DNA) |
45 ng (12μg DNA) |
|
L-plus (リーディングサプライアーL) |
7-10 % (4μg DNA) |
56.5 ng (8μg DNA) |
|
FuGENE 6 トランスフェクション試薬 |
20-30 % (4 μg DNA) |
168 ng (8μg DNA) |
表1.トランスフェクトされた細胞の割合とhFIXタンパク質の発現の比較。
図1. FuGENE 6 トランスフェクション試薬を用いての、pCH110(A)と鮭精子DNA(B)によりトランスフェクトされたHepG2細胞。
FuGENE 6 トランスフェクション試薬により次の改良点が得られました。
- トランスフェクション効率の大きな増加。
- 最も簡単で時間のかからない操作法。
- 高い再現性。
- 多検体を同時にテストできる可能性。
- 細胞に対して、相対的に低い毒性。
|
製品名 |
製品番号 |
包装単位 |
|---|---|---|
|
FuGENETM 6 トランスフェクション試薬 |
0.4 ml |
当社のカタログに掲載する製品は、ライフサイエンス分野の研究のみを目的としています。特に明記のない限り、診断用途目的には使用できません。カスタムバイオテック製品は、特に明記のない限り工業原料用のみを目的としています。
本ウェブサイトでは、幅広い利用者を対象とした製品情報を掲載しています。お住まいの国では利用できない製品、もしくは認可を受けていない製品の詳細情報が掲載されている場合もあります。それぞれの居住国における正当な法的手続や規制、登録、慣習法を満たしていない可能性のある情報の閲覧に関しては、当社は一切の責任を負いません。
〒105-0014 東京都港区芝2-6-1