チロシナーゼ RT-PCR ELISA- RT-PCRによるメラノーマ細胞の簡便な検出

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新製品の酵素免疫測定法チロシナーゼRT-PCR ELISAは高感度、高特異的にRT-PCR増幅によりチロシナーゼのmRNAを定量検出するために特にデザインされています。RT-PCR ELISAはPCRの特性と、スタンダードなELISA法を組み合わせたもので、他の検出法より多くの利点を持ちます。

測定はRT-PCRによるチロシナーゼ特異的mRNA配列の増幅と、ELISAによる増幅物の検出に基づいています。

血液5 mlに加えたMelJu細胞数

血液サンプル数(別人より)

チロシナーゼ陽性サンプル(数)

チロシナーゼ陽性サンプル(%)

0

22

0

0

1

22

10

46

5

22

22

100

表1: ヒト血液中のチロシナーゼmRNAの検出。

 

チロシナーゼRT-PCR ELISAの利点

  • 高感度:チロシナーゼの転写物が40 fgのMelJu細胞mRNAより検出可能。
  • 多くのサンプル数を手間をかけずに処理できる:ready-to-useの試薬とELISA検出法により、サンプルを迅速に、また半自動的に処理できる。
  • 信頼性:mRNAアイソレーションキットとの組み合わせによるシステムで、簡便で制御可能な実験がデザインできる。
  • 機能試験:血液/骨髄安定化試薬で安定化された血液中の、スパイクメラノーマ細胞の定量的検出で、機能試験済み。

サンプル試料としては、ヒト血液や骨髄、組織(リンパ節など)よりの精製mRNA(100 ng mRNA)やトータルRNAが使用できます。少なくとも46サンプルが処理でき、7時間で分析できます。

チロシナーゼはメラノサイトやメラノーマ細胞、末梢グリア細胞を含むニューロエクトダーム由来細胞に特異的に発現しています。チロシナーゼはメ ラノサイトにのみ特異的に発現されるので、細胞株特異マーカーの候補とみなすことができ、通常チロシナーゼ活性ネガティブのサンプル試料(血液、骨髄、リ ンパ節)を用いることにより、メラノーマ細胞を検出することができます。

操作法

時間

1.RT-PCR

約3時間

2.ネステッドPCR

約1.5時間

3.ハイブリダイゼーションと分光光度計による検出

約2.5時間

実際の操作時間

約1時間

表2.アッセイ時間

 

製品名

製品番号

包装単位

チロシナーゼ RT-PCR ELISA

2013762

96回反応

関連製品名

製品番号

包装単位

MIA ELISA

1976826

96回反応

テロメラーゼ PCR ELISA

1854666

96回反応

P53 pan ELISA

1828789

96回反応

mRNA アイソレーションキット(組織用)

1978608

1 kit

mRNA アイソレーションキット(白血球用)

1934325

1.5 ml(5 ml)サンプルを100(30)回精製

mRNA アイソレーションキット(血液/骨髄用)

1934333

1.5 ml(5 ml)サンプルを100(30)回精製

血液/骨髄スタビライゼーション試薬

1934317

サンプル50 ml分

エアロゾル耐性ピペットチップ

1667068

960チップ

Thin-walled PCR チューブ

1667041
1667050

1000チューブ(200μl)
1000チューブ(200μl)

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