効率的なスリー-フラグメントアセンブリーDNAライゲーションに基づくクローニング

2 TIPS and FACTS

Key words: DNA, three-component assembly ligation, cloning strategy

ロシュ・ダイアグノスティックスのラピッドDNAライゲーションキットをスリー-フラグメントアセンブリーDNAライゲーション反応で用い、環状バ クテリオファージDNAを作成した。その効率をスタンダード、あるいは至適化した従来のライゲーション法と比較した。平滑末端と粘着末端のライゲーション を続け、温度シフトを26℃から14℃にした時、得られたトランスフォーマント数は10倍以上に増加した。改変したプロトコールを用いることにより、この 複合的応用のための、信頼性が高く迅速で、非常に効率的な操作法が得られた。

図1. 2種類のDNA断片の、順次的スリー-コンポーネントアセンブリーDNAライゲーションの原理図。2種類のDNA断片は平滑末端と粘着末端の両方を含む。至適化された従来の方法ではステップ1は26℃、ステップ2は14℃で行われた。