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タグ融合タンパク質のバクテリア及び哺乳細胞発現ベクター－必要にあったエピトープタグの選択に
1 New Products
ロシュ・モレキュラーバイオケミカルズではこの度、融合タンパク質に最適なタグを導入できる、バクテリア及び哺乳細胞発現ベクターシリーズを新発売いたします。これらベクターは多くのE. Coli株 (DH5αF’、JM109、HB101など)や広い範囲の哺乳細胞に適しています。このベクターのマルチプルクローニングサイトは大変小さいので、発現 タンパク質に付加されるアミノ酸の数が制限されます。特異的ベクターにより、N-末端およびC-末端にHA、VSV-G、プロテインCなどのタグが選択で きます。それに加え、N-末端にHAやVSV-Gをタグしたものは、さらにC-末端にHis6を標識する事が可能です。His6-タグタンパク質は、Poly-Hisタンパク質精製キットで、簡便に精製できます。
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哺乳細胞発現ベクター |
バクテリア発現 |
N-末端タグ |
C-末端タグ |
|
pHM6 |
pHB6 |
HA |
His6 |
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pVM6 |
pVB6 |
VSV-G |
His6 |
|
pXM |
pXB |
プロテインC |
－ |
|
pMH |
pBH |
－ |
HA |
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pMV |
pBV |
－ |
VSV-G |
|
pMX |
pBX |
－ |
プロテインC |
表1. 新規エピトープタギングベクターの命名法は以下のシステムに基づく。p = プラスミド、H = HAエピトープタグ、X = プロテインCエピトープタグ、V = VSV-Gエピトープタグ、6 = His6、B = バクテリアベクター、M = 哺乳類ベクター。タグを表す文字がBあるいはMの前にある場合はN-末、後ろの場合はC-末にある事を示す。
それぞれのベクターは、トランスフェクション効率、タンパク質の発現効率のモニタリングや、ウエスタンブロッティング実験での標準タグタンパク質を保証する為に、エピトープタグβ-galを発現するコントロールベクターと共に供給されます。
- バクテリアベクターの高い発現レベルは、trp-lacプロモーターによる。培地へのIPTGの添加により、タグタンパク質の高レベルの発現が誘導され る。ベクターはマルチプルクローニングサイトの両側面にATGスタートコドンとストップコドン(TAAあるいはTAG)を含む。T7 RNAポリメラーゼのプロモーターによりアンチセンスRNAプローブが作成できる。
- 哺乳細胞ベクターのタンパク質発現は、効率的なヒトCMVプロモーター配列により増強される。ストップコドン(TMあるいはTAG)は転写終了のために、 マルチプルクローニング配列の末端に含まれる。N-末端のタグ配列を欠く３種類のベクター(pMH、pMV、pMX)には、イニシエーターとしてのメチオ ニンスタートコドンを含むKozak配列を、適切な発現のためクローニングの間に、挿入すべきである。各ベクターはSV40ラージT-抗原を発現している 細胞(COS-7など)やSV40ウイルスを含む細胞株中で遺伝副体的に複製される。SP6およびT7 RNAポリメラーゼのプロモーターによりRNAプローブが作成できる。
アプリケーションノート：新規エピトープタギングベクターを用いてのE. coliおよびCOS 1細胞でのタグLac Zタンパク質の発現
図3. レーン1：His6-HAタグGFPタンパク質(陽性コントロール)、レーン2：pHB6ベクターによるE.coliでのHA(N-末)とHis6(C-末)タグLac Zタンパク質の発現、レーン3：pBHベクターによるE.coliで のHA(C-末)タグLac Zタンパク質の発現、レーン4：pHM6ベクターによるCOS 1細胞でのHA(N-末)とHis6(C-末)タグLac Zタンパク質の発現、レーン5：pMHベクターによるCOS 1細胞でのHA(C-末)タグLac Zタンパク質の発現、レーン6：陰性コントロールCOS 1細胞(トランスフェクトせず)。
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製品名 |
製品番号 |
包装単位 |
|---|---|---|
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バクテリア発現ベクター pHB6TM pVB6TM pXBTM pBHTM pBVTM pBXTM |
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20μg 20μg 20μg 20μg 20μg 20μg |
|
哺乳細胞発現ベクター pHM6TM pVM6TM pXMTM pMHTM pMVTM pMXTM |
|
20μg 20μg 20μg 20μg 20μg 20μg |
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X-Gal |
25 mg |
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IPTG |
1 g |
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CompleteTM Protease Inhibitor Tablets |
20 tablets |
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FuGENETM 6 Transfection Reagent |
1 ml |
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Lumi-Film |
100 films (20.3x25.4 cm) 100films (35x43 cm) |
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関連製品 |
製品番号 |
包装単位 |
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Anti-HA(High Affinity)(3F10) |
50 μg |
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Anti-HA(12CA5) |
200μg |
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|
Anti-HA Biotin(12CA5) |
100μg(500 μl) |
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|
Anti-HA Fluorescein(12CA5) |
100 μg(500 μl) |
|
|
Anti-HA-Peroxidase |
50 μg |
|
|
Anti-HA Rhodamine(12CA5) |
100 μg(500 μl) |
|
|
Anti-Rat Ig-POD |
200 U |
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|
Anti-Protein C |
200μg |
|
|
Anti-Protein C Peroxidase |
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Anti-GFP |
200μg |
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|
MultiTag Marker |
250μg |
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Anti-His6 |
100μg |
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Anti-His6, POD |
50 U |
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BM Chemiluminescence Blotting Substrate (POD) |
1000テスト |
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ExpandTM High Fidelity PCR System |
2500 units |
|
|
High Pure PCR Product Purification Kit |
50回精製 |
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Rapid DNA Ligation Kit |
40回 |
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|
Intelli-SearchTM B Bacterial Colony Screening Kit |
100回 |
|
|
Intelli-Search M Bacterial Colony Screening Kit |
100回 |
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