ルミ・イメージャー －化学発光シグナルの直接定量化に！

2 FEATURES and TECHNICAL TIPS

メンブレン上の核酸やタンパク質の定量は、分子生物学において必須の方法です。フィルムによる測定域での直線性の狭さのため、直接デジタル化のための新技術の開発は大変重要です。今までも放射線シグナルの定量化のための機器は存在しましたが、現在ポピュラーとなったNon-RIの化学発光検出へ応用した場合、大変低い感度しか得られませんでした。化学蛍光シグナルの定量するための機器も開発されましたが、その化学蛍光産物の拡散が、大きなネックとなっています。

ベーリンガー･マンハイムにより開発されたルミ・イメージャー^TMワークステーションは、化学発光画像を取り込む高感度CCDカメラシステムに基づき、解析ソフトウェアであるLumiAnalystで分析及び定量を行ないます。

ここでは従来のフィルムをベースにしたノーザンブロットのNon-RI定量化との比較を行なっています。今回特に感度、直線性、画像のイメージの面に注目しました。

mRNAの定量(Lumi-Imager vs. X-線フィルム)

CLN2 mRNAに対するDIG標識プローブによる、Saccaromyces cerevisaeのトータルRNAのサザンブロットにおいて、ルミ・イメージャーはX-線フィルムと同等の感度を持ち、全ての露光時間において直線性を示します。それゆえ、X-線フィルムに比べて、露光時間に依存しない真の定量が可能となります。

結論

1. ルミ・イメージャーはメンブレン上のシグナルの検出において、少なくともX-線フィルムと同等の感度を持つ。
2. ルミ・イメージャーはX-線フィルムと比較し、より広いシグナル強度域で直線性を示す。

製品名	製品番号	包装単位
Lumi-ImagerTM	1901800
Nylon membrane, positively charged	1417240  1209272 1209299	1ロール  10シート 20シート
Blocking reagent	1096176	50 g
CDP-StarTM	1685627	1 ml
DIG Easy Hyb	1603558	500 ml
DIG Wash and Block Buffer Set	1585762	30ブロット
>DIG DNA Labeling Kit	1175033	40回反応