新しいアポトーシス検出ツールが細胞死に関連したイベントの分析を可能にします アポトーシスが誘導するDNAフラグメンテーション、膜のリン脂質の変化、ICE様プロテアーゼの活性化の分析に!

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細胞プロセスの変化がアポトーシスの指標となる

アポトーシスあるいはプログラムされた細胞死はいくつかの細胞プロセスの変化に関連しています。例えば、原形質膜の不均一性を変化させ、細胞内のDNAをヒストン関連DNA断片に切断し、ICE様プロテアーゼを活性化させます。

図1.ベーリンガー･マンハイムの製品で測定出来る、アポトーシスで変化する細胞プロセス。

ベーリンガー･マンハイムのキットと試薬の製品ラインの充実により、アポトーシス効果の研究がそれぞれの細胞経路で行なえ、アポトーシス実験の結果を色々なパラメーターで確認出来るように成りました。

初期アポトーシス細胞でのDNAフラグメンテーションの測定

初期アポトーシスの間に形態学的変化の出現に先んじて、Ca²⁺依存性エンドヌクレアーゼは細胞DNAをヒストン関連DNA断片(>モノ、オリゴヌクレオソーム)に切断します。ベーリンガー･マンハイムはアポトーシスの指標としてのDNAフラグメンテーションを測定するための、3種類の異なるメソッドに基づいたキットを提供しています。

簡便なCell Death Detection ELISA^PLUSは原形質分画(ライセート)や細胞培養上澄中のヌクレオソーム粒子を測定します。DNAラダー法に比較して1000分の1の細胞しか必要とせず、DNA分離操作も無視出来ますので、定量結果が6-14時間で行なえます。

In Situ Cell Death Detection Kit、フルオレセインはTUNELアッセイを簡単化します。取り込まれたフルオレセイン-dUTPは直接フローサイトメトリーや蛍光顕微鏡で検出されます。In Situ Cell Death Detection Kit、APとPODは光学顕微鏡下での、TUNEL法に基づくアポトーシスの検出や形態学的な局在を可能にします。

図2. In Situ Cell Death Detection Kit、PODでの光学顕微鏡による、ウサギ子宮内膜中のアポトーシス細胞の検出(矢印)。

アポトーシスDNAラダーキットはアポトーシスのもっとも確かな指標であるDNAラダーの検出用に、アポトーシス細胞からDNAを精製します。有機溶媒による抽出やDNAの沈殿操作は含まれません。キット内の陽性コントロールにより、独特なアポトーシスDNAの分析が簡単化されます。

アネキシンVはアポトーシスに関連した細胞膜の脂質の変化を同定する

アポトーシスへの突入は、ホスファチジルセリンの細胞膜の内層より外層への転移を導きます。ホスファチジルセリンに高い親和性で結合するアネキシンvは、アポトーシスが誘導した膜の変化を検出するために使用されます。

アネキシンV-FLUOSとアネキシンV-ビオチンは、フローサイトメトリーによる定量化のためにアポトーシス細胞を標識します。アネキシンV染色セット中のアネキシンV-FLUOSとヨードプロピディウムでの細胞の染色により、細胞懸濁液中でのアポトーシス、ネクローシス、正常細胞の区別が可能となります。細胞培養物もまたアネキシンVにより、蛍光、光学顕微鏡下で分析可能です。

Anti-PARPはアポトーシス誘導タンパク質分解断片を明らかにする

ポリ(ADP-リボース)ポリメラーゼ(PARP)はDNA修復に関与する核内酵素です。多くの細胞種で、アポトーシスでの初期の生化学的イベントは、高度に保存された切断部位で作用するICE様(インターロイキン変換酵素様)プロテアーゼによるPARPのタンパク質分解的切断です。ウエスタンブロットで、Anti-PARPは初期アポトーシス細胞からの抽出物中のタンパク質分解PARP断片を検出します。

多種類のパラメーターの分析によるアポトーシスの確認

ベーリンガー･マンハイムの最新アポトーシス製品に関するこれ以上の情報はホームページでご覧ください(http://biochem.boehringer-mannheim.com)。

製品名	製品番号	包装単位
Cell Death Detection ELISAPLUS	1774425	96テスト
In Situ Cell Death Detection Kit, Fluorescein	1684795	50テスト
In Situ Cell Death Detection Kit, AP	1684809	50テスト
In Situ Cell Death Detection Kit, POD	1684817	50テスト
Apoptic DNA Ladder Kit	1835246	20テスト
Annexin-V-FLUOS	1828681	250テスト
Annexin-V-Biotin	1828690	250テスト
AnnexinV Staining Kit	1858777	50テスト
Anti-PARP	1835238	100μl