マルチ-タグ マーカー- イムノブロッティングと免疫沈降に!

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新製品のマルチ-タグマーカーは、リコンビナントで作成され非糖鎖化されたタンパク質分子量マーカーのプレミックスセットです。

それぞれのマーカーは最も良く使われるエピトープタグであるグルタチオン-S-トランスフェラーゼ、HA(YPYDVPDYA)、c-myc(EQKLISEEDL)およびポリヒスチジン(His6,HHHHHH)が付加されています。マーカーリコンビナントタンパク質(100 kD)は75 kDから10 kDの5つの断片として発現します。このマルチ-タグマーカーは安定化された即時使用可能な溶液タイプで、特にイムノブロッティング(ウエスタンブロットやドットブロット)や免疫沈降での使用にデザインされており、全てのアッセイ法で最適な陽性コントロールです。

図4.色々な抗体でのウエスタンブロットにおけるマルチ-タグマーカーの使用。

A; 5μl(レーン1と3)、2.5μl(レーン4)、0.25μl(レーン2)のマルチ-タグマーカーを4-15% グラジエントSDS-PAGE後、PVDFウエスタンブロッティングメンブレン(レーン1、2と4)とニトロセルロースメンブレン(レーン3)にトランスファーした。ブロッティング後、タンパク質をそれぞれのモノクローナル抗体(Anti-GST, Anti-HA High Affinity (3F10), Anti-c-myc, Anti-His6)とPOD標識二次抗体及び化学発光で検出した。

B; 5μlのマルチ-タグマーカーを、1μgのAnti-HA High Affinity(3F10)とのインキュベーションおよびプロテインG-アガロースとのインキュベーションで免疫沈降した。ペレットを可溶化後、電気泳動し、ウエスタンブロットした。検出はAnti-His6-PODとBMケミルミネッセンスウエスタンブロッティング基質で行った(レーン5)。

1セットで行なえるテスト数は使用する抗体のアフィニティにより異なり、以下のようになります。

  • Anti-HA(クローン12CA5) ; 50ブロット
  • Anti-HA(クローン3F10,高親和性); 1000ブロット
  • Anti-His6; 125ブロット
  • Anti-c-myc;50ブロット
  • Anti-GST; 50ブロット

エピトープタギングはリコンビナントタンパク質の発現/精製に繁用される方法で、対象のタンパク質は融合相手(GST,HA,c-myc,His6)とのキメラとして発現します。この方法により、タグタンパク質はタグ特異的モノクローナル抗体で同定出来、タグタンパク質のサイズや細胞内での局在、翻訳後の修飾、タンパク質間相互作用の説明が可能になります。

製品名 製品番号 包装単位
Multi-Tag Marker 1828649 250μl
関連製品 製品番号 包装単位
Anti-HA(12CA5) 1583816 200 μg
Anti-HA High Affinity(3F10) 1867423 50 μg
Anti-His6 Peroxidase 1965085 50 U 
Anti-c-myc 1667149 200 μg
Anti-c-myc Peroxidase 1814150 500μg
c-myc peptide 1667246 5mg 
Anti-VSV-G 1667351 200 μg
Anti-VSV-G Peroxidase 1814133 500 μg
GST-Western Blotting Kit (Chemiluminescence) 1779834 1 kit 
POROS 20 MC 1771060 50 ml 
POROS Self pack Packing Device 1770110 1パック 

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